"漆酶英文名:Laccase from Rhus vernificera規格:BR,0.5u/mgCAS號:80498-15-3包裝:1克價格:1120別名:漆酶其他包裝:1克;100毫克"
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人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒注意事項:1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(×n×5)。
樣本收集與前期準備 利用ELISA進行臨床檢驗常見的樣本一般包括血液(指血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,精液,陰道分泌物等,這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。(一) 臨床樣本的收集A、血液樣本 有些生理因素,如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化,有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾,以條件一致為宜,如無法避免,應在標本上注明該因素。1.外周血 一般選取左手無名指內側采血,該部位應無凍瘡,炎癥,水腫,破損。如該部位不符合要求,以其他手指部位代替。對燒傷病人,可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規檢測(如白細胞計數、分類等)受生理因素影響波動過大,比較時宜使條件盡量一致。涉及到體內出、凝血功能的檢測項目(如血小板計數,出血時間或凝血時間等)的檢測,一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物,以便在減少或避免干擾因素的影響。2.靜脈血 除涉及各種止血和血栓檢測等項目需采用抗凝靜脈血血漿外,目前絕大多數檢測項目的分析檢測可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測項目中,有些(如血糖,血脂等)受飲食及晝夜因素影響較大,一般以清晨空腹血標本為宜;有些在血中衰變較快(血清酶活性測定如ACP活性等),0~4℃貯存活性減弱也不一,這些項目的檢測必須及時而快速;有些(如肌酸激酶等)受運動等因素影響較大。抽血時避免溶血的發生也十分重要,尤其涉及血鉀,LDH等的測定。B、尿液樣本 同血標本一樣,尿液標本受飲食、運動、藥物量等因素的影響也較大,特別是飲食的影響,故一般來說晨尿優于隨機尿。晨尿是指清晨起床后的次尿標本,較濃縮和酸化,有形成分(如血細胞,上皮細胞,管形)相對集中便于觀察。隨機尿即隨意一次尿,留取方便,但受飲食、運動、藥物影響較甚,易于出現假陽性和假陰性結果,如飲食性蛋白尿,飲食性糖尿,維生素C干擾潛血結果等。餐后尿(午餐后2小時收集的患者尿液)適用于尿糖,尿蛋白和尿膽原的檢查,此時的尿標本可增加試驗敏感性,檢出較輕微的病變。12小時尿細胞計數即Addis計數(前晚8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液),因時間較長,細菌易繁殖,須加入防腐劑甲醛。24小時尿(天晨8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液)中化學物質的定量,包括蛋白,糖,尿17-酮、17-羥類固醇,兒茶酚胺,Ca2+等,檢測不同的物質,選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細菌培養,要求無菌,沖洗外陰后留取標本。所有尿標本的收集都應足量,最少12 ml,50 ml,定時尿須全部收集,對女性患者應避免陰道分泌物、經血污染尿標本。C、糞便樣本 糞便標本的檢測對判斷消化系統疾病有重要參考價值。采集時要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便,對外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計數應收集24小時糞便。查痢疾阿米巴滋養體應于排便后立即檢查,從有膿血和稀軟處取材,保溫送檢。查日本血吸蟲蟲卵時應取粘液、膿血部分,孵化毛蚴時至少留取30g糞便,且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗(化學法),試驗前3日禁食肉類及含動物血食物并禁服鐵劑,維生素C等。所有糞便標本采集后1小時內應檢查完畢,以防止有形成分受消化酶及pH的破壞,來不及檢測的,應及時用PBS進行緩沖處理,離心去上清保存。D、腦脊液樣本 腦脊液標本采集后立即送檢,放置過久將影響檢驗結果:如細胞變性,破壞,導致計數和分類不準;有些化學物質如葡萄糖等將分解含量減少;細菌發生自溶影響細菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個無菌管,管作細菌培養,第二管作化學分析和免疫學檢查,第三管作一般性狀及顯微鏡檢查,三管的順序不宜顛倒。因標本采集較難,全部送檢和檢測過程應注意安全。E、胸腹水樣本 與腦脊液標本一樣,采集后的標本注意安全,及時送檢。一般也分裝三管,一管作常規細胞學檢查,一管生化檢查,一管細菌培養,順序以與腦脊液相同為宜。F、前列腺液樣本 前列腺液標本由前列腺按摩后采集,液量少時直接滴在載玻片上及時送檢,須注意防止標本蒸干,量多時收集在潔凈干燥的試管中。若按摩不出前列腺液,可檢查按摩后的尿液沉渣。G、精液樣本 精液標本采集前應禁欲3~7天,排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中,保溫并及時送檢。由于精子生成日間變動較大,一般應檢查2~3次(每次間隔1~2周)方可做診斷。H、陰道分泌物樣本 陰道標本采集前24小時應禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等,取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材,制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標本,經期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標本。
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標本要求:1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
ELISA實驗代測 北京人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒說明書 (免費代測、免費送貨上門、免費提供Elisa試劑盒說明書)
英文名稱:Human anti-typhus antibody ELISA Kit
ELISA試劑盒規格:48T/96T
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Elisa試劑盒性能1. 靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%
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CAS:85386-98-7,1-(3-碘-2-吡啶基)哌嗪,規格:1gCAS:86873-60-1價格,5-氯吡啶-2-羧酸價格,1gCAS:7758-87-4,磷酸三鈣/β-三磷酸鈣/磷酸鈣/三堿式磷酸鈣/原磷酸鈣/脫磷酸鈣/Calcigenol simple,LR,250克,RT環十五(碳)烯氧化物價格,5gCAS:119692-4價格,2-Methoxy-6-(trifluoromethyl)benzoic acid價格,CAS:220405-40-3,2,2-二氟-1,3-二甲基-咪唑烷,英文名稱:2,2-Difluoro-1,3-dimethylimidazolidine編號:bs-2417R,細胞毒性受體NK-p46抗體,Anti-CD335/NKp46/NCR1,規格:0.1ml/0.2ml,編號:bs-1162R,生長調節致癌基因β/黑素瘤生激因子抗體,Anti-GROβ(growth regulatedoncogeneβ),規格:0.1ml/0.2ml,[1,1'-Bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium(II價格,氘代重水10*1ml,99.9%,CAS:14109-72-9價格,1-甲基硫代-2-價格,5gEPA505有機農藥-Mix1,標準品,EPA505Mix1,CAS:352525-98-5,6-乙氧基-2-萘硼酸,英文名稱:6-Ethoxy-2-naphthaleneboronicacid3-Chloro-5-fluoro-4-methoxyphenylacetic acid價格,2CAS:7439-92-1價格,鉛價格,15x15cm甲肝抗體(IgG)*,方法:CB(進口原料),標準范圍:,標準范圍:定性,反應溫度及時間:45℃2小時 ,加樣量:10μl,RTh聚乙烯亞胺價格,10mlCAS:1641-61-8,環己基磷酸二甲酯,規格:10gCAS:79950-65-5,N-Boc-N'-芐氧甲基-L-組氨酸,英文名稱:N-Boc-N'-benzyloxymethyl-L-histidineCAS:350988-62-4價格,3-鄰-基-1H-吡唑-4-甲醛價格,1gCAS:6362-63-6,3-氰基-3-苯基酸乙酯,純度:97%,規格:5g2357-52-0|4-溴-2-氟苯甲醚,產品名稱:4-溴-2-氟苯甲醚CasNo:2357-52-0分子式:C7H6BrFO分子量:20503含量:98%CAS:138-52-3,D(-)-水楊苷,英文名稱:D(-)-SalicinCAS:685-83-6,雙(二乙基氨基)氯膦,純度:94%,規格:5g槐角苷CAS:152-95-4,Sophoricoside,升血糖作用;槐角浸羔注射于家兔,能使血糖一時性增高。據南京藥物研究所報道,從槐角中提出的染料木素和山柰酚,具有干擾孕卵運輸、終止孕卵著床和抗早期 兔白介素17說明書(IL-17)Elisa檢測試劑盒價格CAS:1413038價格,1,4-雙(1-羥基環己基)-1,3-丁二炔價格,5gCAS:1302-93-8,硅酸鋁,英文名稱:Aluminumsilicate兔子S100B蛋白 S-100B價格Elisa試劑盒現貨,rabbit Soluble protein-100B,S-100B ELISA試劑盒,96T/48T88-60-8|6-叔丁基間甲酚,產品名稱:6-叔丁基間甲酚 Cas No.:88-60-8 分子式:C11H16O 分子量:164.25 含量:98%CAS:112022-83-0價格,(R)-2-甲基-CBS-氧雜硼啶單水合物價格,250mgCAS:141-90-2,2-硫脲嘧啶,英文名稱:2-ThiouracilCAS:121-89-1,間硝基苯乙酮,英文名稱:3′-NitroacetophenoneCAS:89466-08-0,2-羥基苯硼酸,97%價格|現貨,Hydroxyphenylboronic Aci,0.9796T/48T,人(TGFβ2),轉化生長因子β2Elisa試劑盒,Human transforming growth factors β2,TGFβ2 ELISA試劑盒 CAS:110-03-2,2,5-二甲基-2,5-己二醇,純度:99%,規格:5g編號:bs-0585R,Smad4抗體,Anti-Smad4(Mothersagainstdecapentaplegichomolog4),Anti-Smad4(Mothersagainstdecapentaplegichomolog4)CAS:48234-64-6,(三苯甲基)三苯基氯化磷,純度:98%,規格:10g苯甲醚,規格及包裝:AR,500ml硝酸鈰,規格及包裝:AR,25gCAS:6315-90-8價格,4,5-亞甲基-2-硝基肉桂酸價格,5gCAS:106950-18-9,4-Phenyl-2-(4-pyridyl)thiazole,純度:97%,規格:1g
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種類:進口分裝和原裝、國產【人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 】
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 注意事項:1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒
硼酸,Boricacid,產地:Amresco[分],規格:500g大孔吸附樹脂D101(0.3-1.25mm),規格型號:500gCAS:1303-96-4價格,十水四硼酸鈉價格,500gCAS:294-80-4價格,1,5,9-三氮雜環十二烷價格,100mgCAS:23299價格,1-(4-Chlorophenyl)-2-(isopropylamino)ethanol價格,33657-49-7|丁酸氯甲酯,產品名稱:丁酸氯甲酯 Cas No.:33657-49-7 含量:98%CAS:110-54-3價格,正己烷價格,2.5L現GMS80012.5,石蠟切片彈性纖維(ELASTIC)馬森(MASSON)染色試劑盒,50次現貨,大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體Elisa試劑盒價格|保質量,Rat Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA試劑盒,96T/48T,CAS:104197-14-0價格,4-溴-2,6-二氟苯甲醚價格,1g特級胎牛血清,產地:GIBCO,規格:500MLCAS:2235-01-0價格,苯甲酮二甲基縮酮價格,5g人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)Elisa試劑盒價格,Human tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP-5b ELISA試劑盒,96T/48TCAS:634-47-9價格,2-氯-4-甲基喹啉價格,5g10XTBS洗滌液500mlCAS:123-91-1價格,1,4-二氧六環價格,4x1L丙三醇,規格:GR,單位:500mlCAS:105-11-3價格,對苯醌二肟價格,50gCAS:171364-80-0價格,4-(甲氧羰基)苯硼酸頻哪酯價格,1gCAS:621-84-1價格,氨基甲酸芐酯價格,25gCAS:580-16-5價格,6-羥基喹啉價格,5gCAS:1314-56-3價格,氧化磷(V)價格,500g二乙胺基鎵價格,500mgCAS:15329-69-8價格,N-芐基馬來酸價格,5gCAS:108-18-9價格,二異丙胺價格,1LHuman OAZ1 PrimerCAS:13678-59-6價格,2-甲基-5-(甲基硫代)呋喃價格,2gCAS:37699-43-7價格,2,3-二甲基-4-硝基吡啶N-氧化物價格,1gCAS:108-10-1價格,4-甲基-2-戊酮價格,500mlCAS:77-73-6價格,二聚環戊二烯價格,100mlCAS:132741-30-1價格,2,4-二氟苯基乙醇酸價格,1g239087-12-8|3-氟-5-(三氟甲基)苯基乙腈,產品名稱:3-氟-5-(三氟甲基)苯基乙腈CasNo:239087-12-8分子式:C9H5F4N分子量:20314含量:98%CAS:136-51-6價格,2-乙基己酸鈣鹽價格,5g胍,GuanidineHcl,產地:Amresco[分],規格:500gCAS:1254000價格,7-氯-2H-1,4-苯并噻唑-3(4H)-酮價格,1g
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒等相關ELISA試劑盒產品說明書下載地址:http://www.shxysw.net/shxysw-Article/ 注意事項
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。
5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請最后乘以稀釋倍數。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒規格:96T/48T 產品保存條件:低溫
產品范圍:
人,小鼠,大鼠,豬,兔,其它動物細胞因子;細胞凋亡,活性多肽、自身抗體 ,血栓與止血,
骨代謝,肝纖維化,腫瘤,激素內分泌、自身抗體科研ELISA檢測試劑盒
提供實驗代測服務
特異性:本試劑盒可同時檢測天然或重組的,且與其他相關蛋白無交叉反應。
有效期:6個月
預期應用:ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的含量。
說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。
2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3.中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準。
4.剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正常現象,不會對實驗結果造成任何影響。
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,最好用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2. 標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
標本的采集及保存
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則:
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。最后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。
如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
操作步驟
實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
注:
1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
洗板方法手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 更多產品信息,請點擊進入公司網址:www.shxysw.net
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北京綠源博德 是一家集研發、生產和銷售于一體的高科技生物技術公司。
經國家相關部門批準注冊和和技術服務于一體的高科技企業,目前已與國內各大科研單位、高校、醫院以及化工食品等領域實驗室建立了長期良好的合作關系。致力于向國內外生命科學研究人員提供一流的產品和服務。
公司業務主要涵蓋以下幾個方面:
▲試劑盒:ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、分子生物學試劑盒、細胞凋亡試劑盒。
▲細 胞:原裝進口原代細胞、細胞系、細胞株、專業培養基、常用傳統培養基。
▲生化試劑:原裝進口生化試劑、進口分裝生化試劑、國產生化試劑以及分子生物學試劑。
▲抗 體:進口原裝抗體、進口分裝抗體、一抗、二抗。
▲耗 材:細胞培養耗材、普通實驗耗材。
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人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒(酶聯檢測) ELISA的基本原理有三條:(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學活性;(2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;(3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。酶聯免疫(ELISA)使用試劑盒檢測過程中值得關注的問題1、儀器質控 為使儀器保持最佳工作狀態,應建立維護和校正儀器的標準操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍)、溫箱、洗板機和酶標儀。◎移液器: ELISA加樣量小(20-200μl),其準確性直接影響實驗結果,利用稱重法檢查:低、中、高三個刻度分別吸取指示量的水,萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確,一般應在±5%以內;◎恒溫箱: 經常檢查恒溫箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內)實測溫度是否一致,允許有±1℃的誤差;◎洗板機: 每個廠家設置洗板后的殘留液有各自的規定,一般不超過2μl;人工扣板時,墊紙不濕;定期檢查管孔是否堵塞;◎酶標儀:經常維護其光學部分,防止濾光片霉變,定期檢測校正,使其保持良好的工作性能。2、試劑盒選擇◎應盡量選擇正規廠家,產品經相應政府部門審核認可,試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價。◎靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質的最低量的能力;2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。◎特異性:常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應,使測定結果升高,可能導致假陽性,所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。◎精密度:ELISA試劑一般指其批內CV%,其值應小于15%;定量試劑應同時考察線性范圍。◎準確度:通過添加回收實驗進行評價。◎簡便性:指在不影響試劑的前三項指標的前題下,實驗和測定步驟越少越好,在定性實驗中結果判斷簡單明了,定量試驗結果計算也應簡單。◎安全性:指試劑對操作者和環境安全無害無傳染性。◎經濟性:試劑在同等質量條件下通過大規模生產或技術進步降低成本,而市場價格比較合理。◎試劑評價:需要有權威的確證方法和確證的樣品進行檢測。3、樣本前處理注意事項3.1 均質組織樣本:肉、肝食品類切細,用絞肉機反復絞碎,混合均勻。水產樣本:去除樣品的非食用部分,食用部分切細,用均質器均漿;原料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗。蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻。水果、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。3.2 振蕩提取 將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內的樣品充分接觸以深入到樣本組織內部,提取待測組分。3.2.1振蕩方式:振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。3.2.2 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時,應邊加邊振蕩,防止組織凝結成團,不利于提取。3.3. 在用有機溶劑提取過程中,如果出現乳化現象,解決的方法有:①用細頭輕輕的攪拌,破壞乳化后,再重復離心。②再加入適量的提取劑,重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數不變。3.4 濃縮 由于凈化過程中引入的溶劑,可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干,再用復溶液溶解干燥殘留物。濃縮方式: 氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。注意:3.4.1在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質干擾。3.4.2在吹樣本時,針頭應在液面上空,避免與樣本接觸,防止產生交叉污染。3.4.3樣本吹干后應立即取下,避免吹的時間過長,影響最終檢測結果。3.4.4不同的藥物,吹干后樣本的保質期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復溶。3.5 凈化 經過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應的雜質或者是含有與待測物結構相似的雜質。將待測組分與雜質分離的過程,我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現有的試劑盒前處理方法中涉及到的最常見的凈化是:液液分配法。 比如:用復溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷,在加入正己烷和復溶液渦動后如果出現乳化現象,可以60℃水浴加熱,至乳化現象消失或減弱后,加大離心轉速進行離心。 實例: A、氟喹諾酮類藥物試劑盒現有的水產樣本前處理方法中,用二氯甲烷作為提取劑。注意: (a)二氯甲烷的密度比水大,離心完后,二氯甲烷在下層,須先用加樣器吸盡上層廢液后,再按要求取適量的下層吹干。 (b)在用加樣器吸取下層的有機相時,正常操作往往取量不準確,此時最好用帶有刻度,且刻度較準確的玻璃管來定量。 (c)上訴情況對有經驗的試驗員還可以通過靈活控制加樣器來控制取樣的準確性。 (d)在振蕩過程中要注意安全。二氯甲烷在振蕩的過程中,如果離心管密封性不是很好,往往容易爆開;在進行振蕩時,不要讓離心管口對準自己或者其他人,避免濺到自己或者他人身上。 (e)試劑盒在使用前充分回溫很必要,如回溫不充分該項目曲線受影響較明顯。 B、硝基呋喃代謝物檢測過程中常見問題 硝基呋喃代謝物有四種:3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-2-內酰脲(AHD)在檢測過程中也需要同其它項目一樣進行添加回收測評,其中需要注意以下幾個問題。 代謝物在組織中是與蛋白呈結合狀態,采用普通的有機溶劑或緩沖液,是無法提取該代謝物的。需要用鹽酸水解后才能使呋喃類代謝物游離,所以在加入去離子水、鹽酸和2-硝基苯甲醛(2-NBA)混合均勻后,其pH應在1-3之間,否則不利用水解代謝物。在衍生化過程中,溫度和時間決定其衍生化產率,衍生化后在加入氫氧化鈉和磷酸氫二鉀時,其pH應在中性左右。由于部分樣本的緩沖能力不同,所以需對其pH進行測定,因為在酸性或堿性環境中,不利于呋喃類代謝物的提取回收,同時也容易出現假陽性。 添加回收的幾種誤區: 呋喃類代謝物提取過程通常分三個關鍵步驟: 水解-----衍生化-----提取 (1)采用標準曲線的最大標準濃度進行添加回收。如德國拜發和我公司AOZ試劑盒中的第6個標準點4.05ppb,AMOZ試劑盒中的第6個標準點8.1ppb。因為這些標準品是已經過衍生化后的標準品,不能代表樣本前處理實驗中的加酸水解和加衍生化試劑衍生這兩個步驟,所以就算回收率很高,但失去了實際參考價值。 (2)完全依賴未衍生的代謝物標準品進行添加回收。因部分未衍生的代謝物在配制成標準品后有一定的有效期,會存在潛在的不穩定因素,而且添加回收僅能考證衍生化和提取兩個關鍵點,不能驗證從組織蛋白中水解呋喃類代謝物的過程,因此也有一定的局限性。 最好的評價方案:采用經LC-MS-MS確證的陰陽性樣品,留作質控樣品,對檢測的樣本和試劑盒進行質量評價。這也是實驗室所出數據可信度最具說服力的關鍵點。4、 酶標分析過程中的注意事項 樣本的檢測是基于抗原抗體的反應,根據標準曲線,判定樣本最終的藥物含量。它要求加樣的準確性和洗板的一致性。在整個加樣的過程中注意實驗室溫度的恒定,保證反應在試劑盒所示的溫度下進行。4.1常見加樣方式A、吸一打二B、吸二打一 在實際操作過程中,提倡用“吸二打一”用這種方式,有如下幾個好處: a、加樣過程中在板孔內不出現或者很少出現氣泡 b、提高加樣速度,縮短前后樣本反應的時間差。在加樣的過程中還應細心注意避免出現下列現象:A、加樣的過程中漏加或者重加;B、加樣的過程中忘記更換吸頭;C、樣本的重加或者漏加;D、忘記記錄樣本的加樣順序。4.2常見的洗板方式A、洗板機洗板;B、多道孔加樣器洗板;C、多孔吸頭洗板; 在洗板的過程中,確保每孔所加洗滌液量的均一,按說明書操作,不可過多,避免溢出板孔,污染其它樣本;過少,則達不到洗滌的效果,容易出現曲線不成線性,花板等情況。4.3 甩板 快速甩盡板孔內的液體,防止板孔里的液體對流或反濺回板孔中產生交叉污染。4.4拍板 輕輕的在吸水紙上扣干板孔內的液體,而且吸水紙只能使用一次。4.5 顯色 值得注意的是,并非試劑盒中所規定的顯色時間是絕對的,因為試劑盒的吸光度值會受環境中的溫度、濕度、酶標板反應時所接觸到的物品的導熱度等有關,實驗操作人員在加完顯色液后,可根據顏色的深淺適當的延長或者縮短顯色時間。防止出現吸光值接近或高于酶標儀的最高檢測靈敏度(OD值在2.5-3.0之間),這樣會間接影響到檢測結果,如出現曲線前半部份梯度不明顯或顛倒數值等現象,也就造成了一些假陽性或部分檢測結果偏低的現象。 人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒(酶聯檢測) 下面將ELISA法與免疫熒光(IFA)和放射免疫(RIA)的各自優缺點作一簡要的比較(表4),供參考:表4:三種方法的優缺點比較:
方法種類 比較指標 | | | |
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相關產品:人骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA試劑盒人可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand,sRANKL ELISA試劑盒人1,25二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human 1,25-dihydroxyvitamin D3,DVD/DHVD 3 ELISA試劑盒人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human histon-H2b ELISA試劑盒人骨保護素(OPG)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human Osteoprotegerin,OPG ELISA試劑盒 人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA試劑盒人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA試劑盒人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA Ki人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human Bone morphogenetic protein 2,BMP-2 ELISA試劑盒人環磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA試劑盒人甘露聚糖結合凝集素相關絲氨酸蛋白酶(MASP)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human mannan binding lectin associated serine protease,MASP ELISA試劑盒人周期素依賴性激酶7(CDK-7)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human Cyclin-dependent kinase 7,CDK-7 ELISA試劑盒人周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISA試劑盒(酶聯檢測) Human Cyclin-dependent kinase 2,CDK-2 ELISA試劑盒人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒(酶聯檢測) 更多相關信息請垂詢:www.shbmd.com