Rat Interleukin 10(IL-10)
ELISA Kit
Catalog No. CSB-E04595r
(96T)
l This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of rat IL-10 concentrations in serum, plasma and Tissue Homogenates.
l Expiration date six months from the date of manufacture
l FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The microtiter plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to IL-10. Standards or samples are then added to the appropriate microtiter plate wells with a biotin-conjugated polyclonal antibody preparation specific for IL-10 and Avidin conjugated to Horseradish Peroxidase (HRP) is added to each microplate well and incubated. Then a TMB (3,3',5,5' tetramethyl-benzidine) substrate solution is added to each well. Only those wells that contain IL-10, biotin-conjugated antibody and enzyme-conjugated Avidin will exhibit a change in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The concentration of IL-10 in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.
DETECTION RANGE
3.12 pg/ml-200 pg/ml. The standard curve concentrations used for the ELISA’s were 200 pg/ml, 100 pg/ml, 50 pg/ml, 25 pg/ml, 12.5 pg/ml, 6.25 pg/ml, 3.12 pg/ml.
SPECIFICITY
This assay recognizes rat IL-10. No significant cross-reactivity or interference was observed.
SENSITIVITY
The minimum detectable dose of rat IL-10 is typically less than 0.78 pg/ml.
The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection (LLD) was defined as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero.
MATERIALS PROVIDED
Reagent | Quantity |
Assay plate | 1 |
Standard | 2 |
Sample Diluent | 1 x 20 ml |
Biotin-antibody Diluent | 1 x 10 ml |
HRP-avidin Diluent | 1 x 10 ml |
Biotin-antibody | 1 x 120μl |
HRP-avidin | 1 x 120μl |
Wash Buffer | 1 x 20 ml (25×concentrate) |
TMB Substrate | 1 x 10 ml |
Stop Solution | 1 x 10 ml |
STORAGE
1. Unopened test kits should be stored at 2-8°C upon receipt and the microtiter plate should be kept in a sealed bag. The test kit may be used throughout the expiration date of the kit, provided it is stored as prescribed above. Refer to the package label for the expiration date.
2. Opened test plate should be stored at 2-8°C in the aluminum foil bag with desiccants to minimize exposure to damp air. The kits will remain stable until the expiring date shown, provided it is stored as prescribed above.
3. A microtiter plate reader with a bandwidth of 10 nm or less and an optical density range of 0-3 OD or greater at 450nm wavelength is acceptable for use in absorbance measurement.
REAGENT PREPARATION
Bring all reagents to room temperature before use.
1. Wash Buffer If crystals have formed in the concentrate, warm up to room temperature and mix gently until the crystals have completely dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate into deionized or distilled water to prepare 500 ml of Wash Buffer.
2. Standard Centrifuge the standard vial at 6000-10000rpm for 30s. Reconstitute the Standard with 1.0 ml of Sample Diluent. This reconstitution produces a stock solution of 200 pg/ml. Allow the standard to sit for a minimum of 15 minutes with gentle agitation prior to making serial dilutions. The undiluted standard serves as the high standard (200 pg/ml). The Sample Diluent serves as the zero standard (0 pg/ml). Prepare fresh for each assay. Use within 4 hours and discard after use.
3. Biotin-antibody Centrifuge the vial before opening. Dilute to the working concentration using Biotin-antibody Diluent(1:100), respectively.
4. HRP-avidin Centrifuge the vial before opening. Dilute to the working concentration using HRP-avidin Diluent(1:100), respectively.
Precaution: The Stop Solution provided with this kit is an acid solution. Wear eye, hand, face, and clothing protection when using this material.
OTHER SUPPLIES REQUIRED
Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm, with the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.
Pipettes and pipette tips.
Deionized or distilled water.
Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate washer.
An incubator which can provide stable incubation conditions up to 37°C±0.5°C.
SAMPLE COLLECTION AND STORAGE
l Serum Use a serum separator tube (SST) and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 15 minutes at 1000 g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20°C. Centrifuge the sample again after thawing before the assay. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
l Plasma Collect plasma using citrate, EDTA, or heparin as an anticoagulant. Centrifuge for 15 minutes at 1000 g within 30 minutes of collection. Assay immediately or aliquot and store samples at -20°C. Centrifuge the sample again after thawing before the assay. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
l Tissue Homogenates 100mg tissue was rinsed with 1X PBS, homogenized in 1 mL of 1X PBS and stored overnight at -20° C. After two freeze-thaw cycles were performed to break the cell membranes, the homogenates were centrifuged for 5 minutes at 5000 x g, 2 - 8°C. The supernate was assayed and removed immediately. Alternatively, aliquot and store samples at -20°C or -80℃. Centrifuge the sample again after thawing before the assay. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.
ASSAY PROCEDURE
Bring all reagents and samples to room temperature before use. It is recommended that all samples, standards, and controls be assayed in duplicate. All the reagents should be added directly to the liquid level in the well. The pipette should avoid contacting the inner wall of the well.
1. Add 100μl of Standard, Blank, or Sample per well. Cover with the adhesive strip. Incubate for 2 hours at 37°C.
2. Remove the liquid of each well, don’t wash.
3. Add 100μl of Biotin-antibody working solution to each well. Incubate for 1 hour at 37°C. Biotin-antibody working solution may appear cloudy. Warm up to room temperature and mix gently until solution appears uniform.
4. Aspirate each well and wash, repeating the process three times for a total of three washes. Wash: Fill each well with Wash Buffer (200μl) and let it stand for 2 minutes, then remove the liquid by flicking the plate over a sink. The remaining drops are removed by patting the plate on a paper towel. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance.
5. Add 100μl of HRP-avidin working solution to each well. Cover the microtiter plate with a new adhesive strip. Incubate for 1 hour at 37°C.
6. Repeat the aspiration and wash five times as step 4.
7. Add 90μl of TMB Substrate to each well. Incubate for 10-30 minutes at 37°C. Keeping the plate away from drafts and other temperature fluctuations in the dark.
8. Add 50μl of Stop Solution to each well when the first four wells containing the highest concentration of standards develop obvious blue color. If color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
9. Determine the optical density of each well within 30 minutes, using a microplate reader set to 450 nm.
CALCULATION OF RESULTS
Using the professional soft "Curve Exert 1.3" to make a standard curve is recommended, which can be downloaded from our web.
Average the duplicate readings for each standard, control, and sample and subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve by reducing the data using computer software capable of generating a four parameter logistic (4-PL) curve-fit. As an alternative, construct a standard curve by plotting the mean absorbance for each standard on the x-axis against the concentration on the y-axis and draw a best fit curve through the points on the graph. The data may be linearized by plotting the log of the IL-10 concentrations versus the log of the O.D. and the best fit line can be determined by regression analysis. This procedure will produce an adequate but less precise fit of the data. If samples have been diluted, the concentration read from the standard curve must be multiplied by the dilution factor.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.
Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.
It is important that the Standard Diluent selected for the standard curve be consistent with the samples being assayed.
If samples generate values higher than the highest standard, dilute the samples with the appropriate Standard Diluent and repeat the assay.
Any variation in Standard Diluent, operator, pipetting technique, washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in binding.
This assay is designed to eliminate interference by soluble receptors, binding proteins, and other factors present in biological samples. Until all factors have been tested in the Immunoassay, the possibility of interference cannot be excluded.
TECHNICAL HINTS
Centrifuge vials before opening to collect contents.
When mixing or reconstituting protein solutions, always avoid foaming.
To avoid cross-contamination, change pipette tips between additions of each standard level, between sample additions, and between reagent additions. Also, use separate reservoirs for each reagent.
When using an automated plate washer, adding a 30 second soak period following the addition of wash buffer, and/or rotating the plate 180 degrees between wash steps may improve assay precision.
To ensure accurate results, proper adhesion of plate sealers during incubation steps is necessary.
Substrate Solution should remain colorless or light blue until added to the plate. Keep Substrate Solution protected from light. Substrate Solution should change from colorless or light blue to gradations of blue.
Stop Solution should be added to the plate in the same order as the Substrate Solution. The color developed in the wells will turn from blue to yellow upon addition of the Stop Solution. Wells that are green in color indicate that the Stop Solution has not mixed thoroughly with the Substrate Solution.
產品規格:48T/96T
檢測方法: ELISA酶聯免疫法
說 明 書:隨貨發送,也可直接聯系在線銷售索取
測試種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、鴨elisa試劑盒等種屬
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。
試劑盒保存及有效期:2-8℃,避光保存:6個月。
產品產地:進口/國產
產品庫存:
品牌:自主研發/進口原裝
產品價格:價格優惠,歡迎來電洽談!
試劑盒使用范圍:僅供科研檢測,不得用于臨床.
產品價格:價格優惠,歡迎來電洽談!
ELISA試劑盒定性定量檢測一步到位,可同時大批量完成多種屬的檢測工作,而且一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,正規專業的我們,一定能幫您,將實驗做得更好,更精確。試驗過程中,如有任何疑問都可和我們聯系,無論是售前、售中、售后我們都將始終如一,將優質服務進行到底本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中酸性磷酸酶(ACP)含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠酸性磷酸酶(ACP)水平。用純化的小鼠酸性磷酸酶(ACP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入酸性磷酸酶(ACP),再與HRP標記的酸性磷酸酶(ACP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的酸性磷酸酶(ACP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠酸性磷酸酶(ACP)濃度。小鼠酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒組成:試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存說明書 1份 1份 封板膜 2片(48) 2片(96) 密封袋 1個 1個 酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存標準品:720ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存小鼠酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒樣本處理及要求:1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。小鼠酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒操作步驟標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為 詳見說明書(業務人員可提供))。加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。小鼠酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒注意事項:試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 (此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為 (詳見說明書)以上。2.批內與批見應分別小于(詳見說明書) 檢測范圍: 詳見說明書(業務人員可提供) 保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月
關于ELISA試劑盒
ELISA試劑盒在國內有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。
ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到全世界科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內生化領域的長足發展。
Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。
免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應,所以任何優質的診斷試劑離不開優質的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來,隨著分子生物學的發展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現。
HBsAg試劑特點(檢測模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。酶表抗體為與HBsAg有不同結合位點的鼠復合單位,可測得HBsAg變異樣品,提高檢測的特異性(99.98%)提高檢測的靈敏度,應用Parl Ehrich 學說(PEI)HBsAg標準品,對ad標準品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標準品靈敏度為0.025ng/ml
ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與第一次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發生酶-底物反應,只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
LISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。
然而,影響Elisa試驗結果的因素很多,故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。
特點:一、高效、靈敏、特異的抗體; 二、穩定的重復性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體; 四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型; 五、節省實驗經費。
elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標液1PPM,就是1毫克/升,而作出標準數據為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個與真實成分有密切的關系,說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定,樣品水中含有無機氯20mg/L,取100mL被測水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品,測定時忽略體積變化,如果測定出樣品中無機氯為2.98mg/L,則認為回收率為99%。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
5. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
9. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
10. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
11. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
12. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
elisa試劑盒測試要求
做好對照
正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
實驗條件的選擇
在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
檢測范圍和靈敏度不同,用量少時,可使用分裝,前期是它的長久性不是很好。
試劑盒的標準曲線最高點OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。
試劑盒的標準曲線相關系數R≥0.98。
試劑盒重復性好,板內、板間變異系數均<9 %。
試劑的組份都多給20%的富余量,確保完成48/96孔的檢測,避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。
檢測抗體及酶結合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作,保證實驗結果的重復性
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據已經使用的結果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大
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Human tissue inhibitors of metalloproteinase 4,TIMP-4 ELISA Kit人基質金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒96T/48T
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小鼠白介素10受體(IL-10R)elisa試劑盒說明書產品規格:48孔板/96孔板;品牌名稱:RENJIE;性能特點:重復性好、靈敏性高、特異性強;運輸方式:快遞(生物干冰或冰袋運輸)2-3天。品牌:自主研發/進口原裝產品價格:價格優惠,歡迎來電洽談!使用范圍:僅供科研檢測,不得用于臨床.
小鼠白介素10受體(IL-10R)elisa試劑盒說明書代測服務條件1、沒有處理的樣本,我們可以提供免費樣本處理,只收取試劑盒費用。2、標本采集后盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。3、對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發表的文獻,自行設計合理的樣本處理方法。4、干冰運輸(最好安排順豐)。5、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。此產品本司提供免費代測,在接到客戶標本當日起,現貨產品一周內將檢測報告交到客戶手中!多年專業酶免服務,質量保證,期待您的來電!需代測的朋友請注意,試劑盒寄送標本注意事項:委托單位的試驗材料和試劑等均須采用特快專遞形式郵寄,有低溫要求的、固定要求的,按低溫保存、固定防碎方法運輸,以確保實驗物品的安全可靠。
品質保證:1、采用全進口原料和抗體:高效、靈敏、特異,嚴格引進國際技術標準進行批量生產。2、先進的優化方案:重復性高,可靠性。3、技術服務:專業,及時,耐心。4、現貨供應,免費快遞送貨上門。5、elisa試劑盒檢測樣本齊全:(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Monkey, Pig……)用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。小鼠白介素10受體(IL-10R)ELISA試劑盒說明書注意事項:1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.小鼠白介素10受體(IL-10R)ELISA試劑盒說明書不同批號組分不得混用。其他關注產品:
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小鼠白介素10受體(IL-10R)ELISA試劑盒說明書及訂購說明:1、在保質期內如產品出現質量問題,將無條件退換貨。2、購買前一定要提出自己要檢測的什么樣本。3、我司提醒買方在收到產品后,請及時按照我司提供的宣傳資料或產品說明書所列相關技術參數進行驗收產品,如對產品質量有異議,請于7個工作日內書面告知我司,我司將根據情況做出相應處理。4、如因運輸造成的貨物損壞,由供方與運輸方協調解決,需方不承擔由此產生的損失。因不可抗力因素造成我司延期交貨或無法交貨的,我司將及時通知買方而不承擔任何責任。5、付款方式:款到當天下午5點之前發貨,需方一次性100%付清貨款(如有特殊情況可來電咨詢)。6、我司所提供的一切產品,均為科研試劑,僅供科研和實驗用,不得用于注射、食用或其他用途。
產品相冊欣賞:
應用案例:王**:已是第三次購買了,靈敏度不錯,重復性也行,在我做的這些實驗中,與國內同行的盒子相比來說,性價比挺高的,贊一個!張**:盒子蠻不錯,包含所需試劑,并提供了中英文雙版說明書及增值稅發票,很正規,貨到的也快,那么遠!幾天就到了,加上我做實驗,一共五天搞定。姜**:操作挺方便的,也簡單,當然,這也多虧了公司的技術人員詳細的實驗指導,很好,謝謝,實驗也相當成功。李**:第一次用仁捷生物的產品,包裝美觀,實驗效果好,以后買試劑盒什么的就找他們家小張了。施**:評論來的有點晚,因為我是個實用主義者,已經用了,靈敏度不錯,重復性也行,感覺挺好的。
本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷,具體說明書請聯系客服索取,本說明書是通用模板,有些數據不準確.產品規格48T/96T 國產/RD進口分裝/TSZ進口原裝工作原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被樣本抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
注意事項1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。3. 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度。4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
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免責聲明1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。本品為科研試劑,只對單位實驗室學校等正規用途出售。如需資料請向客服索取!企業網站:www.yuduobio.com數十萬產品隨親挑選,正規生物公司,可開具正規機打發票。發票需加6個點。
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人白介素10(IL-10)elisa免疫組化試劑盒英文名稱:Human Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit 常用搜索名稱:人白介素10(IL-10)elisa免疫組化試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗分析方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素, 已廣泛應用在免疫學科研實驗的各領域中。
產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 發貨地 |
人白介素10(IL-10)elisa免疫組化試劑盒 | Human Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit | 48T/96T | 上海 |
產品名稱: 人白介素10(IL-10)elisa免疫組化試劑盒
英文名稱:Human Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit
產品規格:96T/48T
保存條件:2-8℃低溫保存
保質期:6個月,所有試劑盒均提供最新批次。
人白介素10(IL-10)elisa免疫組化試劑盒的基本原理:
人白介素10(IL-10)elisa免疫組化試劑盒注意事項:
1. 從-20℃取出的試劑盒,最好在4℃解凍過夜。盒內每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,避免解凍時出現的分層,否則會出現濃度不均一的現象。
2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3. 配制各種試劑時,切記混勻!
4. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。
5. 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
6. 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活!
7. 為免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和試管。
我們承諾,如果您購買的產品有任何質量問題,我們無條件包退、包換、包運費!請新老客戶放心訂購!
人促血管生成素1(ANG1)酶聯免疫吸附測定試劑盒[Aβ1-40elisa試劑盒]規格型號:96T/48T關鍵詞:[Aβ1-40試劑盒ELISA] 用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)的含量。保存條件:2-8℃保質期:6個月。
人促血管生成素2(ANG2)酶聯免疫吸附測定試劑盒[aZPelisa試劑盒]規格型號:96T/48T關鍵詞:[aZP試劑盒ELISA] 用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)的含量。保存條件:2-8℃保質期:6個月。
人B細胞活化因子 (BAFF/CD257)酶聯免疫吸附測定試劑盒 [AZTelisa試劑盒]規格型號:96T/48T關鍵詞:[AZT試劑盒ELISA] 用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)的含量。保存條件:2-8℃保質期:6個月。
人腦源性神經因子(BDNF)酶聯免疫吸附測定試劑盒 [AZUelisa試劑盒]規格型號:96T/48T關鍵詞:[AZU試劑盒ELISA] 用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)的含量。保存條件:2-8℃保質期:6個月。
人骨成型蛋白2 (BMP-2)酶聯免疫吸附測定試劑盒 [ATGelisa試劑盒]規格型號:96T/48T關鍵詞:[ATG試劑盒ELISA] 用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)的含量。保存條件:2-8℃保質期:6個月。
人骨成型蛋白4 (BMP-4)酶聯免疫吸附測定試劑盒 [ATMAelisa試劑盒]規格型號:96T/48T關鍵詞:[ATMA試劑盒ELISA] 用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)的含量。保存條件:2-8℃保質期:6個月。
人骨成型蛋白7 (BMP-7)酶聯免疫吸附測定試劑盒 [AT-Ⅲelisa試劑盒]規格型號:96T/48T關鍵詞:[AT-Ⅲ試劑盒ELISA] 用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)的含量。保存條件:2-8℃保質期:6個月。染色體及有絲分裂蛋白MIS12抗體現貨供應英文名稱:MIS12
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線粒體核糖體蛋白L11抗體現貨供應英文名稱:Mitochondrial ribosomal protein L11
促血管平滑肌細胞分化因子抗體現貨供應英文名稱:Myocardin
跨膜結構域4亞家族成員2抗體現貨供應英文名稱:MS4A2
磷酸化致癌基因C-Myc抗體現貨供應英文名稱:phospho-C-Myc
肌收縮蛋白MYOT抗體現貨供應英文名稱:Myotilin
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體現貨供應英文名稱:phospho-MAP4K4
環指蛋白59抗體現貨供應英文名稱:RNF59
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體現貨供應英文名稱:phospho-MAP4K4
甲羥戊酸激酶抗體現貨供應英文名稱:MVK
甲羥戊酸脫羧酶抗體現貨供應英文名稱:MVD
胞漿蘋果酸酶1抗體現貨供應英文名稱:ME1
組織相容性復合體蛋白1抗體現貨供應英文名稱:MHC class I
微絲相關蛋白3樣抗體現貨供應英文名稱:MFAP3L
人白介素10(IL-10)elisa免疫組化試劑盒微粒體甘油三酯轉運蛋白現貨供應英文名稱:MTTP
單酰甘油脂肪酶抗體現貨供應英文名稱:Monoacylglycerol Lipase
致癌基因n-Myc抗體現貨供應英文名稱:n-Myc
多藥耐藥相關蛋白3抗體現貨供應英文名稱:MRP3