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人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒

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主要成分:酶標板,試劑,標準品等

性狀:盒裝液體

ELISA試劑盒實驗標本:血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

ELISA試劑盒種屬齊全:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。

產(chǎn)品運輸方面:部分現(xiàn)貨供應,一般為快遞運輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠地方三至五天時間到貨

2、檢測原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

3、服務承諾:工作時間內(nèi)免費技術咨詢和指導,提供來樣檢測及免費代測服務,保證實驗結(jié)果的有效性。

4、研究領域:炎癥研究、神經(jīng)生物學、腫瘤研究、新陳代謝、信號通路、免疫學、傳染病、其他研究。

如果人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒所檢測的樣本不是連續(xù)的,所以實驗中不用的板條立即放回包裝中,密閉封口,4℃可保存1個 月。其余不用試劑應包裝好或蓋好。在做樣本檢測前要有一個完整的計劃,如標本編號、所測項目、目的等。操作時盡量使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

主要分為以下系列:

1、細胞因子檢測試劑盒

2、內(nèi)分泌檢測試劑盒

3、肝纖維化檢測試劑盒

4、心肌梗塞檢測試劑盒

5、腫瘤標志物檢測試劑盒

6、自身免疫檢測試劑盒

7、優(yōu)生優(yōu)育檢測試劑盒

8、傳染病檢測試劑盒等等。

人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒操作步驟

方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為110μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)

2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.51小時,洗滌。

4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml371030分鐘。

5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

方法二 用于檢測未知抗體的間接法:

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至110μg/ml,每孔加0.1ml4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的45、6。

人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒注意事項

1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2. 在人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒實驗中,選擇好各項ELISA實驗條件是很重要的,其中包括:

(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH9.09.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用41824小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.11.010μg/ml)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為110μg/ml

(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(OPD)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMBABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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